روش کلونینگ Gateway

کلونینگ Gateway یک روش کلونینگ مبتنی بر نوترکیبی است. فایده Gateway این است که انتقال یک قطعه DNA از یک پلاسمید به پلاسمید دیگر از طریق یک واکنش نوترکیبی منفرد انجام می‌شود، روند کار به شدت ساده می‌شود و مدت زمان لازم برای کلونینگ کاهش می‌یابد.
برای استفاده از این روش، قطعه‌ای از DNA که می‌خواهید در یک پلاسمید کلون شود باید قبلاً توسط مکان‌های خاص نوترکیبی مجدد احاطه شده باشد (از این نظر با کلونینگ آنزیم محدودکننده چندان بی‌شباهت نیست). برای انجام این کار قطعه DNA شما باید ابتدا با سایت‌های خاص Gateway attB1 و attB2 متصل به انتهای 5 و 3توالی DNA تکثیر شود. سپس این قطعه را می‌توان از طریق یک کلوناز اختصاصی (ایجاد یک کلون اولیه)، به یک پلاسمید اهداکننده Gateway کلون کرد.