ایجاد جهش با روش مگاپرایمر

در روش “مگاپریمر” از سه پرایمر الیگونوکلئوتیدی و دو دور واکنش زنجیره ای پلیمراز (PCR) استفاده می شود 1. یک پرایمرالیگونوکلئوتیدی درون توالیش دارای جهش است. دو پرایمر دیگر فوروارد و ریورس خارجی هستند که در بالادست و پایین دست محل اتصال برای الیگونوکلئوتید جهش زا قرار می گیرند. از پرایمر جهش زا و نزدیکترین پرایمر خارجی در اولین PCR برای تولید و تکثیر قطعه جهش یافته DNA استفاده می شود. این قطعه تکثیر شده – مگاپریمر – در PCR دوم همراه با دیگرپرایمر خارجی باقیمانده برای تکثیر ناحیه با طول بیشتر از DNA استفاده می کند. نکته ای که باید در انجام این تکنیک حتما مد نظر قرار بدید یک اینکه از آنزیم های دارای تصحیح خطا استفاده نکنید و دو اینکه دمای ذوب پرایمرهای اول باید بسیار پایین و دمای ذوب پرایمرها در PCR بعدی بالا در نظر گرفته شود.