تفاوت طراحی پرایمر سنتز cDNA و PCR
آیا از پرایمرهای استفاده شده در سنتز cDNA می توان در PCR زمان واقعی نیز استفاده کرد؟
یا باید دوباره پرایمر مناسب دوباره طراحی کنم؟ اگر اینطور هست ، تفاوت در چیست؟
- شما باید برای ارسال دیدگاه وارد شوید
این به روشی که استفاده می کنید بستگی دارد:
سنجش یک مرحله ایone step یا دو مرحله ای two step.
روش های یک مرحله ای سنتز cDNA و PCR را در یک لوله پشت سر هم انجام می دهند. بنابراین پس از RT-PCR (سنتز cDNA) ، بلافاصله qPCR ادامه خواهد یافت. RT-qPCR یک مرحله ای فقط از پرایمرهای اختصاصی استفاده می کند ، بنابراین شما از همان پرایمرها برای RT-qPCR نیز استفاده خواهید کرد.
در روش های دو مرحله ای ، مراحل رونویسی معکوس و PCR در لوله های جداگانه ، با بافرهای مختلف بهینه شده ، شرایط واکنش انجام می شود. اگر از روش های دو مرحله ای استفاده می کنید ، می توانید سه روش مختلف برای آغاز بکارگیری واکنش های cDNA در روش های دو مرحله ای انتخاب کنید: آغازگرهای الیگو (dT) ، آغازگرهای تصادفی یا آغازگرهای اختصاصی توالی (آغازگرهای qPCR). با این حال ، اگر در سنتز cDNA از آغازگر اختصاصی qPCR استفاده کنید ، سنتز به یک ژن مورد نظر محدود می شود.
- مهمان ها 4 سال قبل پاسخ داد
- شما باید برای ارسال دیدگاه وارد شوید
لطفا جهت ثبت نام ابتدا وارد شوید یا ثبت نام کنید.