استفاده از هضم دوتایی در کلونینگ

برای اینکه اگر از یک آنزیم محدود کننده برای دو طرف ژن و وکتور استفاده شود ممکن است ژن مورد نظر ما به صورت وارونه در وکتور جای بگیرد و هدف ما در کلونینگ اجرا نشود. از آنجایی که جهت رونویسی در یک جهت خاص است و اگر قطعه مورد نظر ما برعکس وارد شود، ژن ما یا تولید نمی‌شود و یا یک پروتئین دیگر تولید می‌شود