کاربرد تکنیک MLPA

MLPA روشی است که در آنه چندین هدف فقط با یک پرایمر تکثیر می شوند. جفت کردن این تغییرات تعداد کپی را در سطح مولکولی تشخیص می دهد و از برنامه های نرم افزاری برای تجزیه و تحلیل استفاده می شود. در معمولی PCR برای هر قطعه از یک جفت آغازگر استفاده می کند ، در نتیجه واکنشی حاوی تعداد زیادی مجموعه آغازگر مختلف است. بازده آغازگرهای مختلف جفت های آغازگر می تواند متفاوت باشد ، بنابراین استفاده از PCR چندگانه معمولی برای تعیین مقدار نسبی توالی های هدف را دشوار می کند. علاوه بر این ، تفاوت های کوچک در شرایط واکنش می تواند منجر به اختلاف زیادی در نتایج بدست آمده شود زیرا هر جفت آغازگر ممکن است کمی متفاوت به تغییر واکنش دهد.

در مقابل ، تمام قطعات موجود در یک واکنش MLPA با استفاده از همان جفت آغازگر PCR تکثیر می شوند و واکنش را بسیار قوی می کنند. ترفند MLPA این است که DNA نمونه تکثیر نمی شود ، بلکه پروب های MLPA است که به نمونه اضافه می شود. هر پروب MLPA متشکل از دو الیگونوکلئوتید جفت شده است که هر یک حاوی یکی از توالی های آغازگر PCR به همراه توالی مکمل توالی هدف DNA است. این دو الیگنوکلئوتید پروب بلافاصله به سایتهای هدف مجاور می روند. فقط هنگامی که دو الیگونوکلئوتید پروب به هدف خود متصل شوند می توان آنها را به یک پروب متصل کرد که حاوی توالی آغازگر فوروارد و ریورس است. این پروب های متصل شده در طول واکنش PCR به صورت نمایی تکثیر می شوند ، در حالی که پروب های غیر لیگاند شده منفرد اولیگونوکلئوتیدها اینگونه نیستند. بنابراین تعداد محصولات حاصل از پروب ها به تعداد توالی های هدف در نمونه بستگی دارد.