PCR

سلام و وقت بخیر
برای استخراج DNA از کیت Qiagen Blood & Tissue DNA kit استفاده کردم اما متاسفانه زمانیکه برای نمونه استخراجی بوسیله ی این کیت pcr میگذارم هیچ محصولی تولید نمیشود در حالیکه برای نمونه هایی که با کیت دیگه ای استخراج کردم pcr به درستی پیش میره. اگر بتونید راهکاری رو برای حل این مشکل به من ارائه بدید ممنون میشم.
نسبت 260/280 من خوبه اما نسبت 260/230 خیلی پایینه

ژنتیک مولکولی

Unknown 3 سال قبل سوال کرد

شما باید برای ارسال دیدگاه وارد شوید

(1) پاسخ

کم بودن نسبت 260/230 احتمالا به دلیل غلظت بالای نمکی و بخصوص نمک گوانیدیوم است که در lysis buffer های کیت ها جهت لیز غشا سلولی و حفاظت از DNA در مقابل نوکئازها وجود دارد.
جهت از بین بردن این الودگی نمکی ابتدا نمونه را رسوب داده سپس آن را دوبار با الکل 70 درصد شستشو دهید.
این الودگی حتما باید برطرف بشود چرا که گوانیدیوم توانایی متوقف کردن انزیم پلیمراز را دارد و مانع پیشروی تکثیر می شود