حداقل حجم qPCR

من از 2X SybrGreen mix برای انجام واکنش های ریل تایمم استفاده میکنم. حجمی که در پروتکل مسترمیکس برای انجام واکنش پیشنهاد شده 25 میکرولیتر است و من انی حجم رو تا 15 میکرلیتر کاهش دادم. میخواستم ببینم آیا با حجم های کمتر از این هم امکان انجام واکنش وجود داره؟ دستگاه ترمال سایکلر ما Stratagene MX 3000 P machine of Agilent Systems است

ژنتیک مولکولی

Unknown 4 سال قبل سوال کرد

شما باید برای ارسال دیدگاه وارد شوید

(1) پاسخ

سلام
توی آزمایشگاه ژنیران ما از دستگاه های ABI و Rotorgene استفاده میکنیم و تجربه ای در زمینه ی دستگا های Stratagene نداریم. حجم reaction های ما در اینجا 10 میکرولیتر است و واکنشش به درستی پیش میره. اما بنظر میشه با حجم های کمتر هم واکنش رو پیش برد به شرطی که از mineral oil ها مانند پارافین جهت جلوگیری از تبخیر محتویات تیوب استفاده کنید. اگرچه استفاده از حجم های کمتر از 10 میکرولیتر معمولا همراه با یکسری خطاست. اگرچ پارامترهای مختلفی از جمله کارایی آمپلیفیکاسیون، توالی و طول آمپلیکون، متریال پلاستیکی مورد استفاده و ….. همچنین باید تلاش کنید که موارد محدود کننده ی واکنش در حداقل ترین مقدار ممکنه باشند