سنتز cDNA

سلام
بهترین کار اینه که قبل از سنتز cDNA از کیفیت RNA استخراجی اطمینان حاصل بکنید. برای این کار ابتدا RNA رو در دستگاه نانودراپ گذاشته و نسبت 260/280 را بسنجید.اگر نسبت 260/280 در بازه ی استاندارد بود حال باید اونو روی ژل اگارز 2% ران بکنید در صورتیکه RNA ی شما از کیفیت مناسبی برخوردار باشه باید دو باند شارپ مربوط به 18s و 28s ببینید. در صورتیکه این مورد هم اکی بود و مشکلی نداشتن برای نمونه ریل بذارید. در صورتیکه نه ژن رفرنس و نه ژن هدف، هیچکدام تکثیر پیدا نکردند یعنی احتمالا در مرحله ی سنتز cDNA مشکلی وجود داشته بنابراین یکبار دیگر از اول سنتز cDNA رو انجام بدین. در صورتیکه تکثیر در ژن رفرنس اتفاق افتاد اما در ژن هدف تکثیری اتفاق نیوفتاد پس پرایمرهای ژن هدف مشکل داشتند و باید پرایمر های جدیدی طراحی بکنید