RNA Extraction

جذب 230 مربوط به گوانیدیوم تیوسانات است که یک این ماده یک نوع نمک بوده و یکی از اجزای سازنده ی ترایزول. معمولا مقداری از این نمک همراه با نوکلئیک اسید ما رسوب میکند، بخصوص زمانیکه از ایزوپروپانول سرد استفاده بشود. از طرفی نمک ها بعنوان یک عامل مهاری برای آنزیم ها عمل میکنند که همین خود باعث تداخل در مراحل پایین دستی می شود. بنابراین این آلودگی باید در پایین ترین حد خود باشد و در صورت وجود برطرف شود.
جهت برطرف کردن یا به حداقل رساندن این آلودگی می توان از راهکار زیر استفاده کرد:
1) RNA استخراجی را با آب به حجم 500 میکرولیتر برسانید.
2) اضافه کردن 50 میکرولیتر سدیم استات با pH 5.5 و غلظت 3 مولار
3) اضافه کردن یک نوع carrier برای افزایش غلظت RNA استخراجی مثلا اضافه کردن 10 میکروگرم گلیکوژن ( این مرحله اختیاریه)
4) اضافه کردن 500 میکرولیتر ایزوپروپانول هم دمای اتاق، بطور کامل میکس میکنیم و میگذاریم به مدت 20 دقیقه در دمای اتاق باشد. در این مرحله می توان پلیت و رسوب RNA را مشاهده کرد.
5) پلیت RNA را به مدت 10 دقیقه با دور 13k rpm در دمای 4 درجه سانتیگراد، سانتریفیوژ میکنیم
6) دوبار با اکل 70% سرد شستشو میدهیم
7) پس از خشک شدن کامل الکل، برحسب اینکه چه مقدار رسوب گرفتیم، محلول حل کننده به آن اضافه میکنیم